补充材料

G3BP1的泛素化以特定环境的方式介导应激颗粒的分解

Youngdae Gwon,Brian A. Maxwell,Regina-Maria Kolaitis,Peipei Zhang,Hong Joo Kim,J.Paul Taylor

材料/方法,补充文本,表格,图表和/或参考文献

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  • 表S1的标题
  • 电影S1至S12的标题
  • 图。S1到S6
表文件S1
综合应力颗粒蛋白质组和VCP适配器。表显示在应激颗粒和图5A中使用的综合应激颗粒蛋白质组中鉴定的蛋白质列表。该表还包含35个VCP适配器的列表。

图像,视频和其他媒体

电影S1
通过TAK-243减轻热休克诱导的胁迫颗粒的拆卸。TAK-243存在或不存在U2OS GFP- g3bp1细胞分别在37°C孵育2 min、43°C孵育30 min、37°C孵育88 min,间隔30秒监测GFP信号。如图1,M, N。
电影S2
受抗热辐射的抗拆卸受损由G3BP1 6KR或10KR组成的热休克诱导的应激颗粒。U2OS.G3BP1/2在37℃下稳定地表达GFP-G3BP1 WT,NTF 2L 6KR,RRM 4Kr或NTF2L / RRM 10KR的DKO细胞2分钟,40分钟,37℃,118分钟,监测GFP信号间隔30秒。见图。2,F和G.
电影S3
通过损失ATP损失热休克诱导应激颗粒的拆卸受损。将U2OS GFP-G3BP1细胞在37℃下在37℃下孵育2分钟,40分钟,60分钟,37℃,118分钟,并以30秒的间隔监测GFP信号。见图。S3,D和E.
电影S4
通过短(30分钟)暴露于热休克产生的应激颗粒的自噬依赖性。将Bafiolomycin A1的存在或不存在的U2OS GFP-G3BP1细胞在37℃下孵育2分钟,43℃,30分钟,37℃持续88分钟。以30秒的间隔监测GFP信号。见图4A。
电影S5
通过中间体(60分钟)暴露于热冲击产生的ructophagy依赖性胁迫颗粒。将BFP-G3BP1细胞在存在或不存在BafiLomycina1的情况下在37℃下孵育2分钟,43℃,60分钟,37℃持续118分钟。以30秒的间隔监测GFP信号。见图4B。
电影S6
通过延长热休克产生的应激颗粒的自噬依赖性。将BFP-G3BP1细胞在存在或不存在下在37℃下在37℃下孵育2分钟,40分钟,37℃,保持148分钟。以30秒的间隔监测GFP信号。见图4C。
电影S7
CB-5083对热冲击引起的应力颗粒的拆卸损伤。将CB-5083的存在或不存在的U2OS GFP-G3BP1细胞在37℃下在37℃下孵育2分钟,43℃,60分钟,37℃,118分钟,并按30秒间隔监测GFP信号。见图4d。
电影S8
通过基因沉默的VCP沉默的热休克诱导应激颗粒的拆卸受损。用非靶向siRNA或VCP siRNA转染U2OS GFP-G3BP1细胞,并在37℃下孵育2分钟,43℃,60分钟,37℃,118分钟,并监测GFP信号间隔30秒.见图4E。
电影S9
通过AlsaSocated VCP突变体拆卸热休克诱导的应激颗粒的拆卸。用pmCherry-N1空载体、VCP WT-mCherry、VCP R155H-mCherry或VCP A232E-mCherry转染U2OS GFP-G3BP1细胞。37°C孵育2 min, 43°C孵育60 min, 37°C孵育88 min,每隔60秒监测mcherry阳性细胞的GFP信号。见图4 G、H。
电影S10
通过控制敲低来限制G3BP1的G3bp1。用非靶向siRNA转染稳定表达光活化G3BP1(PAGFPG3BP1)的U2OS细胞。转染后48小时,通过405nm激光激活ROI,并以200-ms间隔监测GFP信号。见图4,I和J.
电影S11
通过VCP敲低的应力颗粒有限地重新分布G3BP1。用VCP siRNA转染稳定表达光活化G3BP1(PAGFP-G3BP1)的U2OS细胞。转染后48小时,通过405nm激光激活ROI,并以200-ms间隔监测GFP信号。见图4,I和J.
电影S12
FAF2敲低的热休克诱导应激颗粒的拆卸受损。用非靶向siRNA或FAF2 siRNA转染U2OS GFP-G3BP1细胞,并在37℃下在37℃下孵育2分钟,43℃持续60分钟,37℃持续118分钟,并按30秒间隔监测GFP信号.见图5,H和I.